免疫学基本技术免疫电泳
免疫电泳免疫电泳(immuneelectrophoresis)是将琼脂电泳和双向琼脂扩散结合起来,用于分析抗原组成的一种定性方法。由Grabar与Williams于年创立。此项技术由于既有抗原抗体反应的高度特异性,又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力,是广泛应用于生物医学领域的一项免疫学基本技术。正常值检查结果呈阴性。临床意义异常结果:近年来本法主要用于:血清蛋白组分的分析,如多发性骨髓瘤、肝病、全身性红斑狼疮等;抗原、抗体的纯度的检测;抗体各组分的研究等。也常用于检测血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、甲胎蛋白,各类免疫球蛋白的定性和半定量。
需要检查的人群:有相关疾病和症状者,特别是肝病者,还有新生儿可以作预防检测。检查过程先将抗原加到琼脂板的小孔内进行电泳,然后在琼脂板中央挖一横槽,加入已知相应的免疫血清,两者经一定时间相互扩散后,就会在抗原、抗体比例最适处形成沉淀弧。根据沉淀弧的数量、位置和外形,参照已知抗原、抗体形成的电泳图,即可分析样品中所含成分。此方法样品用量少、特异性高、分辨力强。但所分析的物质必须有抗原性,而且抗血清必须含所有的抗体组分。相关疾病抗胰蛋白酶缺乏症,肺胸膜阿米巴病,微小病毒感染,加利福尼亚脑炎,多房棘球蚴病,脑膜炎球菌性脑膜炎,流感嗜血杆菌感染,免疫反应,肝炎,带状疱疹病毒性巩膜炎免疫电泳实验实验材料
待检抗原
试剂、试剂盒抗体琼脂巴比妥缓冲液
仪器、耗材电泳仪载物玻片打孔器玻璃铸型微量进样器
实验步骤1.取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。
2.按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。
3.加待检标本:用微量进样器往孔中加1~5微升。
4.电泳:电压9~7伏/厘米,泳动15~20小时。
5.电泳后取出抗血清槽铸型,加入抗血清,进行双扩散,一般在24小时内沉淀弧出全。
6.观察结果:或描绘、拍照或进行染色,染色后的标本便于结果分析及保存。
图1免疫电泳抗原孔和抗体槽位置示意图
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